Plasmide CRISPR/Cas9 KO RP58 (h): sc-407058

Présentation

ZBTB18 code le répresseur transcriptionnel RP58, doté de doigts de zinc et d’un domaine BTB. Il s’agit d’un régulateur nucléaire qui module des programmes d’expression génique gouvernant le développement neural, la spécification du destin cellulaire et la différenciation. RP58 contribue au contrôle transcriptionnel associé à la chromatine en recrutant des complexes corépresseurs et en façonnant des réseaux transcriptionnels spécifiques de lignée qui influencent la prolifération et la maturation. Dans les cellules humaines, une activité altérée de ZBTB18/RP58 a été associée à une dérégulation de processus neurodéveloppementaux et à des états transcriptionnels aberrants observés dans des contextes pathologiques, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de l’architecture de la régulation génique. Ses effets en aval recoupent des voies impliquées dans la maturation neuronale, la dynamique du cycle cellulaire et la programmation épigénétique.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO RP58 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène ZBTB18 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du ZBTB18, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert ZBTB18 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine RP58.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en ZBTB18 pour l'étude de la signalisation de RP58, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de ZBTB18 essentiels à la fonction de RP58
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de ZBTB18 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le RP58 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le RP58 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus ZBTB18. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le RP58 plasmide HDR (h) et le RP58 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie ZBTB18 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles ZBTB18 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.