RoXaN Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-411701-LAC

O gene humano ZC3H7B codifica a proteína de dedo de zinco RoXaN, um fator associado a RNA implicado na regulação pós-transcricional da expressão génica por meio da ligação ao RNA e da interação com componentes de complexos ribonucleoproteicos. A RoXaN tem sido associada ao controlo do metabolismo de mRNA, incluindo efeitos na estabilidade dos transcritos e na tradução, que podem influenciar programas de estado celular. Por meio destas funções reguladoras de RNA, o ZC3H7B é relevante para estudos de interações hospedeiro–vírus e de processos de resposta ao stress celular, nos quais a remodelação do destino do RNA é um determinante-chave do fenótipo. A regulação alterada de redes de processamento de RNA que envolvem a RoXaN tem sido discutida no contexto de programas de expressão génica relevantes para o cancro e de outras doenças com homeostase de RNA perturbada.

As Partículas de Ativação Lentivirais RoXaN (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de ZC3H7B numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais RoXaN (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição ZC3H7B, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de RoXaN. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo ZC3H7B e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.