RoXaN Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-411701-ACT

ZC3H7B codifica a RoXaN, uma proteína citoplasmática de ligação a RNA implicada na regulação pós-transcricional da expressão génica através de interações com a proteína de ligação à poli(A) e com componentes de complexos de ribonucleoproteínas mensageiras. A RoXaN tem sido associada ao controlo da estabilidade e da tradução do mRNA, apoiando a expressão coordenada de genes envolvidos em respostas ao stress celular e em programas associados ao crescimento. Interações descritas com fatores virais evidenciam um papel na interface hospedeiro–patógeno e na regulação do metabolismo do RNA durante a infeção. A desregulação de proteínas de ligação a RNA e de vias de processamento de mRNA é amplamente relevante para a biologia do cancro e para fenótipos neurológicos e imunológicos, tornando o ZC3H7B um alvo útil para estudos mecanísticos do controlo da expressão génica.

RoXaN O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ZC3H7B sem alterar a sequência de ADN subjacente.

RoXaN O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ZC3H7B em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ZC3H7B, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de RoXaN. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ZC3H7B nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de RoXaN no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via RoXaN em células tumorais com expressão de ZC3H7B silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.