Plásmido CRISPR de Activación (h) RoXaN: sc-411701-ACT

ZC3H7B codifica RoXaN, una proteína citoplasmática de unión a ARN implicada en la regulación génica postranscripcional mediante interacciones con la proteína de unión a poli(A) y con componentes de complejos de ribonucleoproteínas mensajeras. RoXaN se ha relacionado con el control de la estabilidad del ARNm y de la traducción, favoreciendo la expresión coordinada de genes implicados en respuestas de estrés celular y en programas asociados al crecimiento. Las interacciones descritas con factores virales ponen de relieve un papel en la biología de la interfaz huésped–patógeno y en la regulación del metabolismo del ARN durante la infección. La desregulación de proteínas de unión a ARN y de las vías de procesamiento del ARNm es ampliamente relevante para la biología del cáncer y para fenotipos neurológicos e inmunológicos, lo que convierte a ZC3H7B en una diana útil para estudios mecanísticos del control de la expresión génica.

RoXaN El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ZC3H7B sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

RoXaN El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ZC3H7B en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ZC3H7B, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de RoXaN. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ZC3H7B y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de RoXaN en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía RoXaN en células tumorales con expresión de ZC3H7B silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.