Rootletin Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401646
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- Rootletin O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico Rootletin, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:Rootletin Anticorpo (C-2): sc-374056
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
Rootletin Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-401646 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
CROCC codifica a rootletina, uma grande proteína citoesquelética de hélice enrolada (coiled-coil) que forma rootlets ciliares associadas ao centrossoma e contribui para a coesão do centrossoma e para a organização estrutural. A rootletina sustenta a integridade do corpo basal e a ciliogénese, ligando a arquitetura centrossomal à organização dos microtúbulos e à progressão do ciclo celular. A perturbação de CROCC pode afetar redes de sinalização dependentes de cílios e a fidelidade mitótica, processos frequentemente investigados em estudos de ciliopatias, degeneração retiniana e mecanismos de doenças proliferativas. Como componente centrossomal humano, a rootletina também é relevante para a investigação de anomalias do centrossoma, instabilidade cromossómica e polaridade celular.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Rootletin (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene CROCC em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do CROCC, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do CROCC na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Rootletin.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de CROCC para a investigação da sinalização de Rootletin, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) CROCC críticos para a função Rootletin
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos CROCC para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo Rootletin Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo Rootletin Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus CROCC. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo Rootletin Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR Rootletin (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia CROCC para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo CROCC definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.