Plasmide CRISPR/Cas9 KO Rootletin (h): sc-401646
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Rootletin Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique Rootletin, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Rootletin Antibody (C-2): sc-374056
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO Rootletin (h) | sc-401646 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
CROCC code la rootlétine, une grande protéine cytosquelettique à domaines en coiled-coil qui forme des rootlets ciliaires associés au centrosome et contribue à la cohésion du centrosome ainsi qu’à son organisation structurelle. La rootlétine soutient l’intégrité du corps basal et la ciliogenèse, en reliant l’architecture centrosomale à l’organisation des microtubules et à la progression du cycle cellulaire. La perturbation de CROCC peut dérégler les réseaux de signalisation dépendants des cils et la fidélité mitotique, des processus fréquemment étudiés dans les recherches sur les ciliopathies, la dégénérescence rétinienne et les mécanismes des maladies prolifératives. En tant que composant centrosomal humain, la rootlétine est également pertinente pour l’étude des anomalies du centrosome, de l’instabilité chromosomique et de la polarité cellulaire.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Rootletin (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CROCC dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CROCC, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CROCC à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Rootletin.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CROCC pour l'étude de la signalisation de Rootletin, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de CROCC essentiels à la fonction de Rootletin
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CROCC pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le Rootletin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Rootletin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CROCC. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le Rootletin plasmide HDR (h) et le Rootletin (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CROCC pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CROCC définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.