Plasmide CRISPR d'Activation (h) Ron β: sc-400489-ACT

MST1R code le récepteur tyrosine kinase RON, notamment la chaîne de signalisation Ron β, qui assure l’activation du récepteur dépendante du ligand et les cascades de phosphorylation en aval. RON intègre des signaux qui régulent la motilité des cellules épithéliales, la polarisation des macrophages et le tonus inflammatoire, en s’appuyant sur des voies telles que PI3K–AKT, RAS–MAPK et STAT afin de coordonner des programmes de survie, de migration et de différenciation. Une activité aberrante de MST1R/RON a été associée à un remodelage tissulaire dérégulé, à des phénotypes invasifs et à une signalisation modifiée du microenvironnement immunitaire dans de multiples contextes pathologiques, ce qui en fait un nœud pertinent pour étudier le comportement des réseaux de récepteurs tyrosine kinases. Dans des systèmes modèles humains, Ron β soutient des études mécanistiques de l’activation du récepteur, des interactions (cross-talk) avec la signalisation de la famille MET, ainsi que des sorties transcriptionnelles liées à l’adhésion et aux réponses cytokiniques.

Ron β Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MST1R sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Ron β Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MST1R dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MST1R, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Ron β. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MST1R natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Ron β au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Ron β dans les cellules tumorales présentant une expression de MST1R silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.