Plásmido CRISPR de Activación (h) Romo1: sc-417144-ACT

ROMO1 (modulador 1 de especies reactivas de oxígeno) codifica Romo1, una pequeña proteína de membrana mitocondrial que regula la homeostasis intracelular de las especies reactivas de oxígeno (ROS) y la señalización redox. La producción de ROS impulsada por Romo1 influye en la dinámica mitocondrial, el potencial de membrana y las respuestas al estrés oxidativo, y se conecta con vías que controlan la proliferación celular, la apoptosis y la señalización inflamatoria. Se ha reportado una expresión desregulada de ROMO1 en múltiples contextos de cáncer y enfermedades metabólicas, donde un equilibrio redox alterado puede favorecer la supervivencia de las células tumorales, la resistencia a terapias y la disfunción mitocondrial. Como modulador de las ROS mitocondriales, ROMO1 se estudia con frecuencia por su impacto en el daño oxidativo, los programas transcripcionales adaptativos al estrés y las cascadas de señalización dependientes de ROS.

Romo1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ROMO1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Romo1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ROMO1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ROMO1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Romo1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ROMO1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Romo1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Romo1 en células tumorales con expresión de ROMO1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.