Partículas Lentivirales de Activación (h) robo4: sc-401856-LAC

El ROBO4 humano (robo4) codifica un receptor transmembrana enriquecido en endotelio de la familia Roundabout, implicado en el patrón vascular y la estabilidad de los vasos. ROBO4 participa en la señalización de señales de guía e interactúa con vías que controlan la migración endotelial, la remodelación del citoesqueleto y las respuestas angiogénicas, incluida la comunicación cruzada con la señalización dependiente de VEGF. La alteración de la expresión o la función de ROBO4 se ha asociado con una permeabilidad vascular desregulada y con neovascularización patológica, procesos relevantes en microambientes inflamatorios y en la angiogénesis asociada a tumores. Como regulador específico del sistema vascular, ROBO4 se estudia ampliamente en modelos de función de barrera endotelial, dinámica de las uniones célula–célula e interacciones endotelio–estroma.

Las partículas de activación lentiviral robo4 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de ROBO4 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral robo4 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción ROBO4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de robo4. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo ROBO4 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.