robo4 Lentiviral Activation Particles (h): sc-401856-LAC

Human ROBO4 (robo4) kodiert einen im Endothel angereicherten transmembranären Rezeptor der Roundabout-Familie, der an der Gefäßmusterbildung und der Stabilität von Blutgefäßen beteiligt ist. ROBO4 nimmt an der Signalübertragung von Leitfaktoren teil und greift in Signalwege ein, die die Migration von Endothelzellen, die Umgestaltung des Zytoskeletts und angiogene Antworten steuern, einschließlich Wechselwirkungen mit der VEGF-abhängigen Signalgebung. Eine veränderte ROBO4-Expression oder -Funktion wurde mit einer fehlregulierten Gefäßpermeabilität und pathologischer Neovaskularisation in Verbindung gebracht – Prozesse, die für entzündliche Mikroumgebungen und tumorassoziierte Angiogenese relevant sind. Als gefäßspezifischer Regulator wird ROBO4 häufig in Modellen der endothelialen Barrierefunktion, der Dynamik von Zell-Zell-Kontakten und endothelial-stromalen Interaktionen untersucht.

robo4 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente ROBO4-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

robo4 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der ROBO4-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen robo4-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen ROBO4-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.