Plasmide Double Nickase (h) RNF8: sc-401909-NIC

RNF8 code une ligase E3 d’ubiquitine qui agit comme un facteur précoce de signalisation sur la chromatine dans la réponse aux dommages de l’ADN, en catalysant l’ubiquitination aux sites de cassures double brin afin de favoriser le recrutement de médiateurs de réparation en aval. En coordination avec des événements de phosphorylation dépendants d’ATM et des cascades de signalisation par l’ubiquitine, RNF8 contribue à organiser le choix des voies de réparation et soutient, de manière dépendante du contexte, la recombinaison homologue ainsi que la jonction d’extrémités non homologues. L’activité de RNF8 participe au maintien de la stabilité du génome, à la régulation des points de contrôle du cycle cellulaire et au remodelage de la chromatine au niveau de l’ADN endommagé. La perturbation de la signalisation par l’ubiquitine dépendante de RNF8 est fréquemment étudiée dans des modèles d’instabilité génomique et de défauts de réparation de l’ADN associés au cancer.

RNF8 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus RNF8 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de RNF8. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de RNF8. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de RNF8.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.