Plasmide CRISPR/Cas9 KO RNF4 (m): sc-422689

Présentation

Rnf4 code pour RNF4, une ligase ubiquitine de type RING ciblant les protéines SUMO (STUbL), qui reconnaît les protéines polySUMOylées et catalyse leur ubiquitination afin d’orienter leur dégradation ou le remodelage de complexes protéiques. Dans les cellules de souris, RNF4 contribue à la régulation des réponses aux dommages de l’ADN en favorisant l’élimination de facteurs de réparation et de signalisation modifiés par SUMO, reliant ainsi la SUMOylation à la protéostasie dépendante de l’ubiquitine. Cette activité participe à la stabilité du génome, à la gestion du stress de réplication et au contrôle transcriptionnel via une régulation dynamique des assemblages protéiques nucléaires. La dérégulation des voies médiées par les STUbL est largement pertinente pour la transformation cellulaire et pour des phénotypes neurodégénératifs associés à une altération du contrôle qualité des protéines et à des défauts de réparation de l’ADN.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO RNF4 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Rnf4 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Rnf4, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Rnf4 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine RNF4.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Rnf4 pour l'étude de la signalisation de RNF4, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Rnf4 essentiels à la fonction de RNF4
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Rnf4 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le RNF4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le RNF4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Rnf4. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le RNF4 plasmide HDR (m) et le RNF4 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Rnf4 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Rnf4 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.