Plásmido CRISPR de Activación (h) RNF31: sc-412436-ACT

RNF31 codifica una ligasa E3 de ubiquitina que actúa como componente catalítico del complejo ensamblador de cadenas lineales de ubiquitina (LUBAC), promoviendo la ubiquitinación unida a Met1 de intermediarios clave de señalización. A través de la regulación de las cascadas de señalización de NF-κB, del receptor de TNF y de la inmunidad innata, RNF31 ayuda a coordinar la expresión de genes inflamatorios, la supervivencia celular y las respuestas al estrés. Su actividad influye en la proteostasis y en la terminación de la señal al moldear interacciones proteicas dependientes de ubiquitina y la estabilidad de complejos. La desregulación de la función de RNF31 se ha asociado con señalización inmunitaria aberrante y el refuerzo de vías oncogénicas en múltiples contextos de enfermedad, lo que la convierte en una diana útil para estudios mecanísticos de redes de señalización impulsadas por ubiquitina.

RNF31 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de RNF31 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

RNF31 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus RNF31 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional RNF31, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de RNF31. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo RNF31 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de RNF31 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía RNF31 en células tumorales con expresión de RNF31 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.