RNF185 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-416413

Übersicht

RNF185 kodiert eine RING-Typ-E3-Ubiquitin-Ligase der äußeren Mitochondrienmembran, die zur Proteinkontrolle beiträgt, indem sie die Übertragung von Ubiquitin auf ausgewählte Substrate katalysiert. Über ubiquitinabhängigen Abbau und Signalgebung wird RNF185 mit der Regulation der mitochondrialen Homöostase, mit mitophagiebezogenen Prozessen sowie mit der Wechselwirkung zwischen mitochondrialer Funktion und angeborener Immun-Signalübertragung in Verbindung gebracht. Beschriebene Interaktionen mit Autophagie- und Entzündungswegen unterstreichen seine Relevanz für die Untersuchung von Stressantworten, die Organelldefekte mit nachgeschalteten transkriptionellen Programmen koppeln. Eine veränderte RNF185-Aktivität wurde in Kontexten untersucht, in denen mitochondriale Dysfunktion und gestörte Proteostase eine Rolle spielen, darunter Neuroinflammation und krebsassoziiertes metabolisches Remodeling.

Das RNF185 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des RNF185-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des RNF185-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von RNF185 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die RNF185-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von RNF185-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der RNF185-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf RNF185-Exone abzielen, die für die RNF185-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere RNF185-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom RNF185 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom RNF185 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des RNF185-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das RNF185 HDR-Plasmid (h) und RNF185 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von RNF185-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten RNF185-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.