Plásmido Doble Nickase (h) RNF170: sc-410169-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)RNF170 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa RNF170 (h) y el plásmido de doble nickasa RNF170 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a RNF170. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) RNF170 | sc-410169-NIC | 20 µg | $410.00 |
RNF170 codifica una ligasa E3 de ubiquitina con dedo RING residente en el retículo endoplásmico, que contribuye al control de calidad proteico al promover la ubiquitinación y la degradación proteasomal de determinados sustratos asociados a la membrana. A través de la degradación asociada al retículo endoplásmico (ERAD) y de la señalización dependiente de ubiquitina, RNF170 contribuye a la proteostasis y puede influir en vías de calcio y de respuesta al estrés vinculadas a la función del RE. La alteración de la actividad de RNF170 se ha asociado con una señalización de ubiquitina desregulada y se ha estudiado en el contexto de la neurodegeneración y otros trastornos en los que se ve perturbada la homeostasis del RE. En consecuencia, RNF170 es una diana útil para investigar la especificidad de las ligasas de ubiquitina, las respuestas al estrés del RE y las redes de señalización aguas abajo en células humanas.
RNF170 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus RNF170 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de RNF170. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de RNF170. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con RNF170 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.