Plasmide CRISPR/Cas9 KO RNF149 (h): sc-406588

Présentation

RNF149 code une protéine contenant un domaine « RING finger », dont la fonction prédite est celle d’une ligase E3 de l’ubiquitine, contribuant ainsi au contrôle ubiquitine‑dépendant de la stabilité des protéines et de la dynamique des voies de signalisation. Les ligases E3 de type RING participent à la régulation de la protéostasie, des réponses au stress et du renouvellement de composants des voies qui influencent la progression du cycle cellulaire et les décisions de survie. RNF149 est donc pertinente pour comprendre comment l’ubiquitination et la dégradation protéasomale coordonnent l’homéostasie cellulaire et la transduction du signal. Une régulation altérée de la voie de l’ubiquitine est fréquemment associée à la biologie tumorale et à d’autres troubles liés au contrôle de la qualité des protéines, ce qui fait de RNF149 une cible utile pour des études mécanistiques dans des modèles pertinents pour les maladies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO RNF149 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène RNF149 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du RNF149, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert RNF149 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine RNF149.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en RNF149 pour l'étude de la signalisation de RNF149, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de RNF149 essentiels à la fonction de RNF149
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de RNF149 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le RNF149 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le RNF149 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus RNF149. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le RNF149 plasmide HDR (h) et le RNF149 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie RNF149 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles RNF149 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.