Plasmide Double Nickase (h) RNF123: sc-403631-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) RNF123 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide RNF123 Double Nickase (h) et le plasmide RNF123 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant RNF123. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: RNF123 Antibody (267.1): sc-101122
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) RNF123 | sc-403631-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) RNF123 | sc-403631-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
RNF123 code une ligase E3 ubiquitine‑protéine qui régule le renouvellement des protéines via leur dégradation protéasomale dépendante de l’ubiquitine et coordonne la reconnaissance des substrats au sein des réseaux de signalisation de l’ubiquitine. En contrôlant la stabilité de certaines protéines régulatrices, RNF123 influence la progression du cycle cellulaire, les réponses au stress cellulaire et des voies liées à la protéostasie et à la transduction du signal. Une perturbation de l’activité des ligases d’ubiquitine peut remodeler les programmes transcriptionnels et le contrôle des points de contrôle, ce qui fait de RNF123 un nœud pertinent pour des études mécanistiques sur la croissance dérégulée et la surveillance du génome. Des altérations de l’expression ou de la fonction de RNF123 ont été rapportées dans des contextes de pathologies humaines où le contrôle de l’homéostasie protéique médié par l’ubiquitination est perturbé.
RNF123 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus RNF123 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de RNF123. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de RNF123. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de RNF123.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.