RNase T2a Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-437175

Descripción general

Rnaset2a codifica la ribonucleasa lisosomal/secretada RNasa T2a, un miembro de la familia conservada de RNasas T2 implicada en el recambio de ARN y el reciclaje de nucleótidos. La RNasa T2a contribuye a la homeostasis celular al promover la degradación del ARN extracelular y del ARN endolisosomal, vinculando el catabolismo del ARN con la función lisosomal y con vías más amplias de respuesta al estrés y de señalización inflamatoria. En modelos murinos, la alteración de la actividad de la familia RNasa T2 se utiliza para estudiar cómo la persistencia anómala de ARN influye en la detección inmunitaria innata, la neuroinflamación y la remodelación tisular. Estos procesos son relevantes para investigaciones mecanísticas de fenotipos similares a los de las enfermedades de almacenamiento lisosomal y de la inflamación estéril asociada a una regulación defectuosa del manejo de ácidos nucleicos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO RNase T2a (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Rnaset2a en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Rnaset2a junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Rnaset2a tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína RNase T2a.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Rnaset2a para la investigación de la señalización de RNase T2a, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Rnaset2a críticos para la función de RNase T2a
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Rnaset2a para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido RNase T2a CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido RNase T2a CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Rnaset2a. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR RNase T2a (m) y el plásmido HDR RNase T2a (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Rnaset2a para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Rnaset2a definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.