Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
RNase H1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422686
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- RNase H1 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico RNase H1, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: RNase H1 Anticuerpo (H-4): sc-376326
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
RNase H1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-422686 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
El gen murino **Rnaseh1** codifica la **RNasa H1**, una endonucleasa específica de estructura que degrada la hebra de ARN de los híbridos ARN:ADN y resuelve los **R-loops** generados durante la replicación y la transcripción. Al procesar intermediarios de los fragmentos de Okazaki y limitar la formación persistente de R-loops, la RNasa H1 contribuye a la estabilidad de los genomas mitocondrial y nuclear, a la progresión de la horquilla de replicación y a la homeostasis transcripcional. La desregulación del metabolismo de los híbridos ARN:ADN se asocia con estrés replicativo, señalización de daño en el ADN y disfunción mitocondrial, lo que convierte a **Rnaseh1** en un nodo útil para estudiar las vías de mantenimiento del genoma. Por ello, la perturbación de **Rnaseh1** es relevante para trabajos mecanísticos sobre el metabolismo de ácidos nucleicos, la biología mitocondrial y los fenotipos de respuesta al estrés en células de mamífero.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO RNase H1 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Rnaseh1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Rnaseh1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Rnaseh1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína RNase H1.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Rnaseh1 para la investigación de la señalización de RNase H1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Rnaseh1 críticos para la función de RNase H1
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Rnaseh1 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido RNase H1 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido RNase H1 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Rnaseh1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR RNase H1 (m) y el plásmido HDR RNase H1 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Rnaseh1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Rnaseh1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.