RMND5A Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-413041

Descripción general

RMND5A (homólogo A de Required for Meiotic Nuclear Division 5) codifica una proteína conservada implicada en el control de calidad de proteínas dependiente de ubiquitina, con funciones descritas en procesos asociados a ligasas E3 de ubiquitina que influyen en la proteostasis y en la progresión del ciclo celular. A través de sus conexiones con la ubiquitinación y el recambio de proteínas reguladoras, RMND5A se estudia en el contexto de respuestas al estrés, control de la proliferación y mantenimiento de la homeostasis celular. La alteración de componentes de la vía de la ubiquitina se asocia con frecuencia con inestabilidad genómica y señalización de crecimiento alterada, lo que convierte a RMND5A en una diana útil para estudios mecanísticos de la proteostasis desregulada en la biología de enfermedades humanas.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO RMND5A (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen RMND5A en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del RMND5A junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de RMND5A tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína RMND5A.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en RMND5A para la investigación de la señalización de RMND5A, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de RMND5A críticos para la función de RMND5A
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de RMND5A para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido RMND5A CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido RMND5A CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus RMND5A. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR RMND5A (h) y el plásmido HDR RMND5A (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología RMND5A para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana RMND5A definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.