Rlf CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-410980

Übersicht

RLF (RLF-Zinkfinger) kodiert Rlf, ein nukleäres DNA-bindendes Protein, das über die Interaktion mit Chromatin und regulatorischen DNA-Elementen an der Transkriptionsregulation beteiligt ist. Rlf enthält Zinkfinger-Motive, die mit Rollen bei der Steuerung von Genexpressionsprogrammen vereinbar sind, welche den Zellzyklusfortschritt, die Differenzierung und die Aufrechterhaltung der zellulären Identität beeinflussen. Eine veränderte Regulation von Transkriptionsnetzwerken unter Beteiligung von RLF wurde mit einer gestörten Kontrolle der Proliferation und weiteren Genexpressionsanomalien in Zusammenhang gebracht, die für die Krankheitsbiologie relevant sind, wodurch es sich als nützliches Ziel für mechanistische Studien in menschlichen Zellen eignet.

Das Rlf CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des RLF-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des RLF-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von RLF nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Rlf-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von RLF-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Rlf-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf RLF-Exone abzielen, die für die Rlf-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere RLF-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Rlf CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Rlf CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des RLF-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Rlf HDR-Plasmid (h) und Rlf HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von RLF-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten RLF-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.