RIN3 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-432255

Descripción general

Rin3 codifica RIN3, un interactuante de Ras y Rab que actúa como factor de intercambio de nucleótidos de guanina (GEF) para las GTPasas de la familia Rab5, enlazando la señalización de receptores tirosina cinasa con el tráfico endocítico. En células de ratón, RIN3 participa en la endocitosis mediada por clatrina, la maduración de endosomas tempranos y la regulación de la internalización y el reciclaje de receptores, procesos que modulan la amplitud y la duración de la señalización aguas abajo. A través de estas funciones, Rin3 influye en la dinámica vesicular, el recambio de membrana y la coordinación del citoesqueleto durante los estados de activación celular. La actividad alterada de RIN3 se ha relacionado con mecanismos relevantes para enfermedad que implican un tráfico endosomal desregulado y señalización de receptores, lo que respalda su estudio en vías que contribuyen a fenotipos inflamatorios y neurodegenerativos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO RIN3 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Rin3 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Rin3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Rin3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína RIN3.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Rin3 para la investigación de la señalización de RIN3, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Rin3 críticos para la función de RIN3
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Rin3 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido RIN3 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido RIN3 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Rin3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR RIN3 (m) y el plásmido HDR RIN3 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Rin3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Rin3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.