Rim3 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-407285

Descripción general

RIMS3 codifica la molécula 3 que interactúa con Rab3 (Rim3), una proteína de andamiaje presináptico que participa en la organización del aparato de liberación de neurotransmisores en las zonas activas. A través de interacciones con las GTPasas Rab3 y otros componentes sinápticos, Rim3 contribuye al acoplamiento y cebado de vesículas, a la exocitosis desencadenada por calcio y al mantenimiento de la eficacia sináptica. Los mecanismos asociados a RIMS3 se entrecruzan con vías de señalización neuronal que regulan la transmisión y la plasticidad sinápticas, procesos frecuentemente implicados en fenotipos del neurodesarrollo y neuropsiquiátricos. La expresión alterada o la variación en RIMS3 se ha investigado en el contexto de disfunción del sistema nervioso, lo que lo hace relevante para estudiar los determinantes moleculares de la organización de la sinapsis y la actividad de la red neuronal.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Rim3 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen RIMS3 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del RIMS3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de RIMS3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Rim3.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en RIMS3 para la investigación de la señalización de Rim3, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de RIMS3 críticos para la función de Rim3
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de RIMS3 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Rim3 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Rim3 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus RIMS3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Rim3 (h) y el plásmido HDR Rim3 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología RIMS3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana RIMS3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.