Plasmide Double Nickase (h) RIF1: sc-408916-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) RIF1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide RIF1 Double Nickase (h) et le plasmide RIF1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant LRIF1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) RIF1 | sc-408916-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) RIF1 | sc-408916-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le RIF1 humain (Replication Timing Regulatory Factor 1) est une protéine associée à la chromatine qui coordonne le choix de la voie de réparation des cassures double brin de l’ADN et la régulation des origines de réplication. Il agit en aval de la signalisation des dommages pour favoriser la jonction d’extrémités non homologues (NHEJ) en s’opposant à la résection des extrémités d’ADN, et il contribue au contrôle du timing de réplication ainsi qu’à la stabilité des fourches pendant la phase S. Par ces fonctions, RIF1 influence l’intégrité du génome, les processus liés aux télomères et les réponses cellulaires au stress de réplication. La dérégulation des voies associées à RIF1 est fréquemment étudiée dans des contextes d’instabilité chromosomique et de capacité de réparation de l’ADN altérée, observées dans divers modèles pertinents pour les maladies.
RIF1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus LRIF1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de LRIF1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de LRIF1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de LRIF1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.