Plásmido CRISPR de Activación (h) RIC-3: sc-405366-ACT

El gen humano RIC3 codifica RIC-3, una chaperona residente del retículo endoplásmico que favorece el plegamiento, el ensamblaje y el tráfico de canales iónicos activados por ligando seleccionados, en particular los receptores nicotínicos de acetilcolina. Al controlar la maduración del receptor y su expresión en la superficie celular, RIC-3 influye en la transmisión sináptica colinérgica, la excitabilidad neuronal y los programas de señalización posteriores dependientes de calcio. La regulación alterada de la biogénesis de los receptores nicotínicos y de la función de las redes colinérgicas se ha vinculado a fenotipos neurológicos y neuropsiquiátricos, lo que convierte a RIC3 en un nodo útil para estudiar la proteostasis de los receptores y la señalización sináptica. RIC-3 también se utiliza como una herramienta mecanística para analizar el control de calidad del RE, la estequiometría de los complejos de canales y los cambios dependientes del estímulo en la disponibilidad de receptores.

RIC-3 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de RIC3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

RIC-3 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus RIC3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional RIC3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de RIC-3. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo RIC3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de RIC-3 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía RIC-3 en células tumorales con expresión de RIC3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.