Plasmide CRISPR d'Activation (h) Ribosomal Protein S5: sc-404960-ACT

Le gène humain **RPS5** code la protéine ribosomique **S5**, un composant essentiel de la petite sous-unité ribosomique **40S**, nécessaire au décodage fidèle de l’ARNm et à l’initiation de la traduction. Dans le cadre de la biogenèse des ribosomes cytosoliques, **RPS5** contribue à la maturation de l’ARNr, à l’assemblage des particules **pré-40S** et au maintien de la fidélité traductionnelle, ce qui influence l’homéostasie globale des protéines. Une perturbation du dosage des protéines ribosomiques peut déclencher des réponses de stress ribosomal, avec des effets en aval sur le contrôle du cycle cellulaire et l’apoptose, reliant ainsi une fonction ribosomique altérée à des programmes de croissance oncogénique et à des ribosomopathies congénitales. Comme la production traductionnelle façonne l’adaptation au stress et la prolifération, **RPS5** est fréquemment étudié dans des voies reliant la synthèse protéique, la protéostasie et la fitness cellulaire.

Ribosomal Protein S5 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de RPS5 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Ribosomal Protein S5 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus RPS5 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription RPS5, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Ribosomal Protein S5. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus RPS5 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Ribosomal Protein S5 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Ribosomal Protein S5 dans les cellules tumorales présentant une expression de RPS5 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.