Plásmido CRISPR de Activación (h) Ribosomal Protein S16: sc-403364-ACT

RPS16 codifica la proteína ribosomal humana S16, un componente conservado de la subunidad ribosomal pequeña 40S, necesaria para una decodificación precisa del ARNm y un inicio eficiente de la traducción. Como parte de la biogénesis ribosomal y de la síntesis proteica citoplasmática, RPS16 sostiene programas de crecimiento celular y vías de proteostasis que acoplan la señalización de nutrientes con la salida traduccional. Las alteraciones en la dosis y el ensamblaje de proteínas ribosomales pueden desencadenar respuestas de estrés nucleolar y remodelar redes transcripcionales vinculadas a p53, conectando la integridad del ribosoma con el control del ciclo celular. Se ha informado de una expresión aberrante de proteínas ribosomales, incluida RPS16, en múltiples contextos de enfermedad y con frecuencia se examina como un marcador de capacidad traduccional alterada en estados proliferativos y adaptados al estrés.

Ribosomal Protein S16 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de RPS16 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Ribosomal Protein S16 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus RPS16 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional RPS16, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Ribosomal Protein S16. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo RPS16 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Ribosomal Protein S16 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Ribosomal Protein S16 en células tumorales con expresión de RPS16 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.