Ribosomal Protein L8 Double Nickase Plasmid (m): sc-424161-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Ribosomal Protein L8 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Ribosomal Protein L8 Double-Nickase-Plasmid (m) und Ribosomal Protein L8 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Rpl8 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Ribosomal Protein L8 Double Nickase Plasmid (m) | sc-424161-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Ribosomal Protein L8 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-424161-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Mouse Rpl8 kodiert das ribosomale Protein L8, eine Kernkomponente der großen 60S‑Ribosomenuntereinheit, die die Ribosomenbiogenese und eine effiziente Elongation der Translation unterstützt. Als Teil der ribosomalen Maschinerie trägt RPL8 zu Proteostase-Programmen bei, die mit der mTOR‑regulierten Translationskontrolle sowie der zellulären Antwort auf Nährstoffverfügbarkeit und Stress verknüpft sind. Störungen ribosomaler Proteine können die globale Proteinsynthese beeinträchtigen und nukleoläre Stresswege auslösen, die mit der Zellzyklusregulation und der p53‑Signalgebung zusammenlaufen. Da die Ribosomenleistung Proliferation, Differenzierung und Stressanpassung beeinflusst, wird Rpl8 häufig in Kontexten untersucht, in denen Translationskapazität und Ribosomenintegrität krankheitsrelevante Phänotypen prägen.
Ribosomal Protein L8 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Rpl8-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Rpl8 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Rpl8-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Rpl8-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.