Plásmido CRISPR de Activación (h) Ribosomal Protein L39: sc-410990-ACT

RPL39 codifica la proteína ribosomal L39, un componente pequeño y básico de la subunidad ribosomal grande 60S que contribuye al ensamblaje del ribosoma y a interacciones estables entre el ARNr y las proteínas, necesarias para una traducción citosólica eficiente. Como parte de la maquinaria central de traducción, RPL39 influye en la proteostasis y en programas de crecimiento celular estrechamente acoplados a la señalización de mTOR, las respuestas integradas al estrés y la biogénesis ribosomal. Las perturbaciones en la expresión de proteínas ribosomales pueden modificar la capacidad y la fidelidad de la traducción, alterando la síntesis de reguladores implicados en el control del ciclo celular y la adaptación al estrés. La biogénesis ribosomal y la traducción desreguladas son características recurrentes de múltiples cánceres y ribosomopatías hereditarias, lo que convierte a RPL39 en un nodo útil para investigar cómo el rendimiento traduccional moldea fenotipos relevantes para la enfermedad.

Ribosomal Protein L39 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de RPL39 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Ribosomal Protein L39 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus RPL39 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional RPL39, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Ribosomal Protein L39. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo RPL39 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Ribosomal Protein L39 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Ribosomal Protein L39 en células tumorales con expresión de RPL39 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.