Plásmido CRISPR de Activación (h) Ribosomal Protein L13A: sc-403494-ACT

RPL13A codifica la proteína ribosomal L13A, un componente central de la subunidad ribosomal grande 60S, necesaria para el ensamblaje del ribosoma y la elongación eficiente de la traducción. Más allá de su función estructural en el ribosoma, L13A participa en programas de control traduccional vinculados al estrés celular y a la señalización inflamatoria, incluidas vías sensibles al interferón que modulan de forma selectiva la traducción de determinados ARNm. La biogénesis ribosomal alterada y la síntesis proteica desregulada son características frecuentes de estados proliferativos y de adaptación al estrés, lo que hace que RPL13A sea relevante para estudios sobre el control del crecimiento celular y la proteostasis. Como gen ribosomal de expresión amplia, RPL13A también se utiliza con frecuencia como referencia en flujos de trabajo de expresión génica, y su regulación puede ayudar a interpretar procesos de remodelación traduccional global.

Ribosomal Protein L13A El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de RPL13A sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Ribosomal Protein L13A El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus RPL13A en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional RPL13A, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Ribosomal Protein L13A. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo RPL13A y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Ribosomal Protein L13A en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Ribosomal Protein L13A en células tumorales con expresión de RPL13A silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.