Plasmide CRISPR d'Activation (h) Ribosomal Protein L11: sc-401955-ACT

RPL11 code la protéine ribosomique L11, un constituant essentiel de la grande sous-unité ribosomique 60S, qui soutient la biogenèse des ribosomes et une élongation de la traduction efficace. Au-delà de son rôle structural, RPL11 participe à la signalisation du stress nucléolaire en modulant l’axe MDM2–TP53, reliant les perturbations de l’assemblage ribosomal au contrôle du cycle cellulaire et à l’apoptose dépendants de p53. Des altérations de la dose ou de la fonction de RPL11 sont associées à des phénotypes de ribosomopathie et à des voies impliquées dans le cancer, via des effets sur la protéostasie, la régulation de la croissance et la surveillance des points de contrôle. En conséquence, RPL11 est fréquemment étudié dans des contextes tels que l’intégrité nucléolaire, le contrôle traductionnel et les réseaux suppresseurs de tumeurs sensibles au stress.

Ribosomal Protein L11 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de RPL11 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Ribosomal Protein L11 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus RPL11 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription RPL11, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Ribosomal Protein L11. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus RPL11 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Ribosomal Protein L11 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Ribosomal Protein L11 dans les cellules tumorales présentant une expression de RPL11 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.