Riboflavin kinase Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-418359
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- Riboflavin kinase El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico Riboflavin kinase, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Riboflavin kinase Anticuerpo (E-7): sc-398830
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Riboflavin kinase Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-418359 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
El gen humano **RFK** codifica la **riboflavina quinasa**, una enzima citosólica que fosforila la riboflavina (vitamina B2) para formar **mononucleótido de flavina (FMN)**, aportando un precursor clave para la biosíntesis de **dinucleótido de flavina y adenina (FAD)**. Al controlar la disponibilidad intracelular de FMN/FAD, RFK sostiene reacciones redox dependientes de flavoproteínas que afectan el metabolismo oxidativo mitocondrial, la defensa antioxidante y la bioenergética celular en general. La alteración del uso de riboflavina y de la homeostasis de cofactores flavínicos se ha asociado con disfunción metabólica y fenotipos vinculados al estrés oxidativo, lo que convierte a RFK en un nodo útil para estudiar la enzimología dependiente de vitaminas. Por tanto, la función de RFK es relevante para investigaciones sobre procesos mitocondriales, señalización redox y regulación nutriente–cofactor en modelos de células humanas.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO Riboflavin kinase (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen RFK en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del RFK junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de RFK tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Riboflavin kinase.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en RFK para la investigación de la señalización de Riboflavin kinase, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de RFK críticos para la función de Riboflavin kinase
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de RFK para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido Riboflavin kinase CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Riboflavin kinase CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus RFK. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Riboflavin kinase (h) y el plásmido HDR Riboflavin kinase (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología RFK para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana RFK definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.