Plasmide Double Nickase (h) RhoB: sc-400875-NIC

RHOB code la petite GTPase RhoB, un régulateur associé aux membranes de la dynamique de l’actine et du trafic vésiculaire, qui alterne entre les états liés au GDP et au GTP afin de contrôler la forme cellulaire, l’adhérence et la motilité. RhoB intègre les signaux en aval des récepteurs aux facteurs de croissance et des voies de stress cellulaire, influençant le transport endosomal, le renouvellement des récepteurs et le remodelage du cytosquelette via des réseaux d’effecteurs de la famille Rho. Elle participe à des processus tels que la migration, la fonction barrière et les réponses apoptotiques ou d’adaptation au stress, reliant le trafic membranaire à des sorties transcriptionnelles et cytosquelettiques. Une dérégulation de la signalisation RHOB a été associée à des modifications du comportement invasif et des réponses au stress induit par les traitements dans des modèles de cancer, ainsi qu’à des rôles plus larges dans des contextes vasculaires et inflammatoires.

RhoB Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus RHOB dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de RHOB. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de RHOB. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de RHOB.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.