RhoB Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400875

Descripción general

RHOB codifica RhoB, una pequeña GTPasa prenilada de la familia Rho que regula la dinámica del citoesqueleto de actina, el tráfico endocítico y el recambio de receptores de membrana. RhoB alterna entre estados unidos a GDP y a GTP para modular nodos de señalización vinculados a la adhesión celular, la migración, el transporte vesicular y las respuestas al estrés, con conexiones funcionales con vías que incluyen Rho/ROCK y procesos más amplios influenciados por MAPK y PI3K. A diferencia de otras GTPasas Rho estrechamente relacionadas, RhoB se encuentra enriquecida en membranas endosomales y con frecuencia se induce por estrés celular, lo que la sitúa como un mediador clave de la compartimentalización de la señalización. La expresión o actividad alteradas de RHOB se han asociado con fenotipos relacionados con el cáncer, la señalización inflamatoria y la biología vascular, por lo que resulta relevante para estudios mecanísticos de proliferación, invasión y señalización impulsada por receptores.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO RhoB (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen RHOB en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del RHOB junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de RHOB tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína RhoB.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en RHOB para la investigación de la señalización de RhoB, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de RHOB críticos para la función de RhoB
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de RHOB para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido RhoB CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido RhoB CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus RHOB. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR RhoB (h) y el plásmido HDR RhoB (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología RHOB para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana RHOB definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.