Plasmide CRISPR d'Activation (h) Rho 8: sc-403363-ACT

RND3 (Rho 8) est une GTPase atypique de la famille Rho qui agit principalement comme régulateur de la dynamique du cytosquelette d’actine, de la forme cellulaire et de la motilité. Elle module la signalisation RhoA/ROCK et, en aval, la phosphorylation de la chaîne légère de la myosine, influençant l’assemblage des fibres de stress, l’adhérence et la contractilité. RND3 interagit également avec des voies contrôlant la progression du cycle cellulaire et l’apoptose, notamment les réponses associées à PTEN–PI3K/AKT et à p53. Une expression dérégulée de RND3 a été rapportée dans de multiples contextes de recherche sur le cancer et les maladies cardiovasculaires, où un remodelage cytosquelettique altéré et des signaux de survie contribuent à des phénotypes associés à la maladie.

Rho 8 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de RND3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Rho 8 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus RND3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription RND3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Rho 8. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus RND3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Rho 8 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Rho 8 dans les cellules tumorales présentant une expression de RND3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.