Plasmide CRISPR d'Activation (h) Rho 7: sc-404094-ACT

Le gène humain **RND2** code **Rho 7**, une petite GTPase atypique de la famille Rho, qui régule le remodelage du cytosquelette d’actine, l’extension des neurites et la dynamique membranaire via la modulation des réseaux de signalisation des GTPases Rho. L’activité de Rho 7 influence la morphologie cellulaire, la migration et l’adhérence en interagissant avec des voies qui coordonnent la contractilité du cytosquelette et le trafic vésiculaire. **RND2** a été associé à des programmes de neurodéveloppement et à la différenciation neuronale, et des profils d’expression altérés ont été rapportés dans divers contextes impliquant une dérégulation de la motilité cellulaire et des signaux de survie. Ces propriétés font de Rho 7 une cible utile pour étudier les processus dépendants du cytosquelette et les programmes transcriptionnels qui façonnent l’identité et le mouvement cellulaires.

Rho 7 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de RND2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Rho 7 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus RND2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription RND2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Rho 7. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus RND2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Rho 7 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Rho 7 dans les cellules tumorales présentant une expression de RND2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.