Plásmido CRISPR de Activación (h) Rheb: sc-400539-ACT

El gen humano **RHEB** codifica **Rheb**, una pequeña GTPasa relacionada con Ras que actúa como un activador clave aguas arriba de **mTORC1**, integrando señales de factores de crecimiento y nutrientes para coordinar la síntesis de proteínas, la supresión de la autofagia y el metabolismo celular. La actividad de Rheb está controlada por el complejo **TSC1–TSC2**, que vincula la señalización **PI3K–AKT** y las respuestas al estrés energético con la salida de la vía de mTOR. La señalización desregulada **RHEB–mTORC1** se asocia con un crecimiento celular aberrante y una reprogramación metabólica, y se estudia con frecuencia en el contexto de la biología del cáncer y los trastornos del neurodesarrollo. Como regulador proximal de mTORC1, Rheb se utiliza ampliamente para investigar el control de la traducción, la señalización lisosomal y la homeostasis adaptativa al estrés.

Rheb El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de RHEB sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Rheb El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus RHEB en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional RHEB, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Rheb. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo RHEB y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Rheb en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Rheb en células tumorales con expresión de RHEB silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.