Plasmide CRISPR/Cas9 KO RHBDL6 (h): sc-404212

Présentation

RHBDF2 code pour RHBDL6, une protéase intramembranaire à sérine de la famille des rhomboïdes, qui se localise aux endomembranes et contribue à la protéolyse régulée de substrats associés aux membranes. L’activité de RHBDL6 a été liée au contrôle qualité des protéines, au trafic intracellulaire et au renouvellement de composants de signalisation, en s’intégrant à la dégradation associée au réticulum endoplasmique (ERAD) et à des programmes d’adaptation au stress qui façonnent la protéostasie cellulaire. Par ces mécanismes, RHBDL6 peut influencer les sorties de signalisation des facteurs de croissance et de l’inflammation, notamment des voies liées à la disponibilité des ligands de l’EGFR et à la modulation de l’immunité innée. Une dérégulation du traitement médié par les protéases rhomboïdes a été associée à un remodelage pathologique des réseaux de signalisation dans la biologie du cancer et dans des modèles de maladies inflammatoires, ce qui étaye l’étude de la protéolyse dépendante de RHBDL6 dans des contextes pertinents pour les maladies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO RHBDL6 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène RHBDF2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du RHBDF2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert RHBDF2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine RHBDL6.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en RHBDF2 pour l'étude de la signalisation de RHBDL6, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de RHBDF2 essentiels à la fonction de RHBDL6
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de RHBDF2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le RHBDL6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le RHBDL6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus RHBDF2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le RHBDL6 plasmide HDR (h) et le RHBDL6 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie RHBDF2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles RHBDF2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.