RGS7 Double Nickase Plasmid (m): sc-423946-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das RGS7 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- RGS7 Double-Nickase-Plasmid (m) und RGS7 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Rgs7 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
RGS7 Double Nickase Plasmid (m) | sc-423946-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
RGS7 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-423946-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Rgs7 kodiert den „Regulator of G‑Protein Signaling 7“ (RGS7), ein in Neuronen angereichertes GTPase-aktivierendes Protein, das die Inaktivierung von Gαi/o und verwandten Untereinheiten beschleunigt und dadurch die GPCR-Signalübertragung beendet. Indem RGS7 die Kinetik und Amplitude neurotransmitterausgelöster Signalwege formt, moduliert es Second-Messenger-Ausgänge einschließlich cAMP/PKA sowie die nachgeschaltete Regulation von Ionenkanälen, die die neuronale Erregbarkeit und die synaptische Transmission beeinflussen. RGS7 wirkt in makromolekularen Komplexen mit Gβ5 und Membranankern wie R7BP, um Lokalisation und Signal-Bias über neuronale Schaltkreise hinweg zu steuern. Eine dysregulierte zeitliche Steuerung von GPCR-Signalen, vermittelt durch Proteine der RGS-Familie, ist relevant für Untersuchungen zu neuroverhaltensbezogenen Phänotypen und zu schaltkreisbezogenen Mechanismen, die in der Biologie neurologischer und psychiatrischer Erkrankungen eine Rolle spielen.
RGS7 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Rgs7-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Rgs7 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Rgs7-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Rgs7-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.