RGS4 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-418013

Descripción general

RGS4 codifica el Regulador de la Señalización de Proteínas G 4, una proteína activadora de la GTPasa que acelera la terminación de la señalización impulsada por GPCR al promover la hidrólisis de GTP de la subunidad Gα. Al restringir vías downstream de segundos mensajeros como la señalización de AMPc/PKA y PLCβ/Ca2+, RGS4 modula la desensibilización del receptor, la excitabilidad neuronal y las salidas transcripcionales dependientes del estímulo. Se expresa en múltiples tejidos, con funciones destacadas en el sistema nervioso, y se ha vinculado a la modulación de la señalización sináptica y a procesos del neurodesarrollo. Las alteraciones en la expresión de RGS4 y en el equilibrio de su señalización se han asociado con fenotipos neuropsiquiátricos y cognitivos, lo que la hace relevante para estudios mecanísticos de la regulación de las vías de GPCR.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO RGS4 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen RGS4 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del RGS4 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de RGS4 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína RGS4.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en RGS4 para la investigación de la señalización de RGS4, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de RGS4 críticos para la función de RGS4
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de RGS4 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido RGS4 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido RGS4 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus RGS4. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR RGS4 (h) y el plásmido HDR RGS4 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología RGS4 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana RGS4 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.