Plasmide Double Nickase (h) RGS17: sc-416360-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) RGS17 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide RGS17 Double Nickase (h) et le plasmide RGS17 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant RGS17. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
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Plasmide Double Nickase (h) RGS17 | sc-416360-NIC | 20 µg | $410.00 |
RGS17 (Regulator of G protein signaling 17) est un membre de la famille des RGS qui accélère l’hydrolyse du GTP sur les sous-unités Gα activées, atténuant ainsi la signalisation en aval des récepteurs couplés aux protéines G (GPCR). En limitant les voies de seconds messagers induites par les GPCR, notamment l’axe AMPc/PKA et les sorties associées aux MAPK, RGS17 contribue à modeler l’amplitude et la durée des réponses déclenchées par les récepteurs, qui influencent la prolifération, la migration et la signalisation du stress. Une expression dérégulée de RGS17 a été associée à des altérations de la signalisation oncogénique et du comportement des cellules tumorales dans plusieurs contextes de cancer, et elle est également pertinente pour les études des voies neuronales et neuropsychiatriques où la signalisation des GPCR est prépondérante. Par conséquent, RGS17 est fréquemment étudié comme modulateur moléculaire des réseaux de transduction du signal et des phénotypes dépendants du contexte dans des modèles cellulaires humains.
RGS17 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus RGS17 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de RGS17. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de RGS17. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de RGS17.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.