Plasmide CRISPR/Cas9 KO RGPD5 (h): sc-401666

Présentation

RGPD5 (RANBP2-like and GRIP domain containing 5) est un membre spécifique des primates de la famille de gènes RGPD, impliqué dans les processus de transport nucléocytoplasmique grâce à son homologie avec des domaines associés à RANBP2/NUP358. On pense que les protéines de cette famille influencent le trafic régulé par la GTPase Ran, la progression mitotique et l’organisation spatiale de complexes protéiques au niveau de l’enveloppe nucléaire, affectant ainsi des programmes globaux d’expression génique. RGPD5 est souvent évoqué dans le contexte de duplications segmentaires sur le chromosome 2 et de la variabilité du nombre de copies, des caractéristiques qui compliquent l’interprétation spécifique du locus dans les études génomiques. La dérégulation ou les variations structurelles dans les régions de la famille RGPD ont été étudiées en association avec des phénotypes prolifératifs et l’instabilité du génome dans des jeux de données de génomique du cancer, ce qui étaye son utilisation comme cible pour des études mécanistiques du transport nucléaire et du contrôle du cycle cellulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO RGPD5 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène RGPD5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du RGPD5, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert RGPD5 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine RGPD5.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en RGPD5 pour l'étude de la signalisation de RGPD5, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de RGPD5 essentiels à la fonction de RGPD5
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de RGPD5 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le RGPD5 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le RGPD5 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus RGPD5. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le RGPD5 plasmide HDR (h) et le RGPD5 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie RGPD5 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles RGPD5 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.