Plasmide Double Nickase (h) RGNEF: sc-404155-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) RGNEF correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide RGNEF Double Nickase (h) et le plasmide RGNEF Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant ARHGEF28. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) RGNEF | sc-404155-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) RGNEF | sc-404155-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ARHGEF28 code pour RGNEF, un facteur d’échange de nucléotides guanyliques (GEF) de la famille Rho qui active les GTPases de la famille Rho afin de coordonner le remodelage du cytosquelette d’actine, la dynamique de l’adhérence cellulaire et la migration directionnelle. En se couplant à la signalisation dépendante de RhoA et à des effecteurs en aval tels que ROCK et les modules de contractilité de la myosine, RGNEF contribue à ajuster le renouvellement des adhésions focales et la tension cytosquelettique. RGNEF présente également des caractéristiques de liaison à l’ARN qui ont été associées à la biologie des granules de stress et à la régulation du devenir des ARNm, reliant la signalisation du cytosquelette au contrôle post-transcriptionnel. Le dérèglement des voies associées à ARHGEF28/RGNEF a été étudié dans des contextes comprenant des programmes de motilité altérés et des mécanismes d’agrégation ARN/protéines pertinents pour la neurodégénérescence, ce qui en fait une cible de recherche utile pour des études de voies et de phénotypes.
RGNEF Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ARHGEF28 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ARHGEF28. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ARHGEF28. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ARHGEF28.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.