Plasmide CRISPR d'Activation (h) RGC32: sc-404843-ACT

RGCC code pour le gène de réponse au complément 32 (RGC32), une protéine associée au cycle cellulaire et à l’inflammation, induite par l’activation du complément et par divers signaux de stress cellulaire. RGC32 a été associée à la régulation de la progression G2/M, à la dynamique de la réplication de l’ADN et au remodelage du cytosquelette via des interactions avec les voies des kinases dépendantes des cyclines et la signalisation de la famille Rho, qui influencent la migration cellulaire. Dans des contextes vasculaires et épithéliaux, RGC32 est impliquée dans la modulation des réponses dépendantes du TGF‑β, des programmes de stress oxydatif et de la signalisation immunitaire, des processus fréquemment étudiés dans la fibrose, le remodelage vasculaire et la biologie du microenvironnement tumoral. Une expression altérée de RGCC a été rapportée dans de nombreux contextes pathologiques, ce qui soutient son utilisation comme nœud mécanistique pour l’étude des réseaux géniques de prolifération, de différenciation et d’inflammation.

RGC32 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de RGCC sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

RGC32 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus RGCC dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription RGCC, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de RGC32. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus RGCC natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de RGC32 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie RGC32 dans les cellules tumorales présentant une expression de RGCC silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.