Particules Lentivirales d'Activation (h2) RFX6: sc-408496-LAC-2

Le gène humain RFX6 (regulatory factor X6) code un facteur de transcription à hélice ailée (winged-helix) qui se fixe sur des motifs d’ADN de type X-box afin de contrôler des programmes d’expression génique nécessaires à la spécification de la lignée endocrine pancréatique ainsi qu’à la maturation et au maintien des cellules β productrices d’insuline. Il agit au sein de réseaux transcriptionnels régissant le développement des îlots de Langerhans, la sécrétion hormonale stimulée par le glucose et, plus largement, des voies de régulation génique qui coordonnent les décisions de destin cellulaire des cellules dérivées de l’endoderme. Des altérations génétiques ou une expression dérégulée de RFX6 ont été associées à des anomalies congénitales du pancréas endocrine et à certaines formes de diabète, ce qui en fait un nœud central pour l’étude des mécanismes du diabète monogénique et du dysfonctionnement des cellules des îlots. L’édition génomique de RFX6 permet d’explorer les mécanismes de régulation enhancer–promoteur, l’occupation de la chromatine et les circuits géniques endocrines en aval dans des modèles de différenciation de cellules souches humaines et des systèmes pertinents pour les îlots pancréatiques.

Les particules d'activation lentivirales RFX6 (h2) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de RFX6 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales RFX6 (h2) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription RFX6, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de RFX6. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif RFX6 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.