Plásmido CRISPR de Activación (h) RFX6: sc-408496-ACT

RFX6 (factor regulador X6) es un factor de transcripción de hélice alada que coordina programas de regulación génica necesarios para el desarrollo del páncreas endocrino y el mantenimiento de la identidad de los islotes pancreáticos. En células humanas, RFX6 contribuye a redes transcripcionales que gobiernan la diferenciación de las células beta, la función secretora de insulina y, de forma más amplia, la homeostasis de la glucosa, mediante la regulación de promotores y potenciadores específicos de linaje. La actividad alterada de RFX6 se ha vinculado con trastornos endocrinos congénitos del páncreas y del intestino, así como con fenotipos relacionados con la diabetes, lo que lo convierte en un nodo relevante para estudiar el destino de las células endocrinas, las respuestas al estrés y la señalización metabólica. Como regulador nuclear, RFX6 se investiga comúnmente mediante perfiles de expresión y ensayos basados en cromatina para definir dianas aguas abajo y circuitos transcripcionales de interacción.

RFX6 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de RFX6 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

RFX6 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus RFX6 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional RFX6, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de RFX6. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo RFX6 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de RFX6 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía RFX6 en células tumorales con expresión de RFX6 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.