RFX4 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406366

Descripción general

RFX4 (factor regulador X 4) es un factor de transcripción de hélice alada (winged-helix) de la familia RFX que se une a elementos promotores tipo X-box y ayuda a coordinar programas de expresión génica específicos de cada tipo celular. En biología humana, RFX4 está fuertemente vinculado a procesos del neurodesarrollo, incluida la regulación de redes transcripcionales que influyen en la ciliogénesis, el desarrollo ventricular y los estados de diferenciación en el sistema nervioso central. La alteración de la actividad de RFX4 se ha asociado con una organización anómala del patrón cerebral y fenotipos del neurodesarrollo, lo que lo convierte en un punto de entrada útil para estudiar circuitos reguladores impulsados por factores de transcripción. Dado que las proteínas RFX pueden interactuar con vías que gobiernan la accesibilidad de la cromatina y módulos génicos relacionados con los cilios, la perturbación de RFX4 es relevante para estudios mecanísticos del control del linaje neuronal y de contextos de señalización ciliar.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO RFX4 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen RFX4 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del RFX4 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de RFX4 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína RFX4.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en RFX4 para la investigación de la señalización de RFX4, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de RFX4 críticos para la función de RFX4
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de RFX4 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido RFX4 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido RFX4 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus RFX4. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR RFX4 (h) y el plásmido HDR RFX4 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología RFX4 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana RFX4 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.