RFRP Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406767

Descripción general

NPVF codifica el precursor del péptido relacionado con RFamida, que se procesa para generar los neuropéptidos RFRP, los cuales actúan como ligandos endógenos de los receptores NPFF y modulan la señalización neuroendocrina. En humanos, RFRP se ha implicado en el control hipotalámico de la liberación de gonadotropinas y en la temporización del eje reproductor, integrando señales que influyen en la actividad de las neuronas GnRH y en la secreción hipofisaria de LH/FSH. Esta vía se interconecta con redes neuromoduladoras más amplias mediadas por GPCR que afectan la respuesta al estrés, el balance energético y la fisiología reproductiva vinculada a ritmos circadianos. Las alteraciones en la señalización NPVF/RFRP se han investigado en el contexto de trastornos reproductivos y estados neuroendocrinos desregulados, lo que respalda estudios mecanísticos sobre el procesamiento peptídico, la secreción y la señalización del receptor.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO RFRP (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen NPVF en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del NPVF junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de NPVF tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína RFRP.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en NPVF para la investigación de la señalización de RFRP, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de NPVF críticos para la función de RFRP
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de NPVF para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido RFRP CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido RFRP CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus NPVF. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR RFRP (h) y el plásmido HDR RFRP (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología NPVF para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana NPVF definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.