Plasmide CRISPR/Cas9 KO Rfp2 (h): sc-403870

Présentation

TRIM13 code pour la ligase E3 ubiquitine humaine à doigt RING Rfp2, une protéine principalement associée au réticulum endoplasmique, impliquée dans la protéostasie dépendante de l’ubiquitine et le contrôle qualité du RE. Rfp2 participe à la régulation du renouvellement des protéines et de la signalisation en réponse au stress en favorisant l’ubiquitinylation de substrats, ce qui l’associe à des processus tels que la dégradation associée au RE (ERAD), la régulation de l’apoptose et la modulation des voies de l’immunité innée. Des altérations de l’expression ou de l’activité de TRIM13 ont été étudiées dans des contextes d’adaptation au stress cellulaire et de dérégulation de la signalisation de l’ubiquitine, susceptibles de contribuer à des phénotypes oncogéniques et à des protéinopathies neurodégénératives. En tant que membre de la famille TRIM, Rfp2 constitue un nœud exploitable pour disséquer l’architecture des voies de l’ubiquitine et la signalisation localisée aux organites dans les cellules humaines.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Rfp2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène TRIM13 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du TRIM13, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert TRIM13 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Rfp2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en TRIM13 pour l'étude de la signalisation de Rfp2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de TRIM13 essentiels à la fonction de Rfp2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de TRIM13 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Rfp2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Rfp2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus TRIM13. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Rfp2 plasmide HDR (h) et le Rfp2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie TRIM13 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles TRIM13 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.