Rev-erbα Lentiviral Activation Particles (h2): sc-401211-LAC-2

Das humane NR1D1-Gen kodiert den nukleären Rezeptor Rev-erbα (NR1D1), einen häm-bindenden Transkriptionsrepressor, der den zellulären Stoffwechsel mit der zirkadianen Zeitsteuerung verknüpft, indem er die Genexpression an Rev-erb/ROR-Response-Elementen moduliert. Rev-erbα wirkt innerhalb der zentralen Uhrschaltkreise, indem er die durch BMAL1/CLOCK getriebene Transkription begrenzt, und koordiniert über Interaktionen mit Korepressoren wie NCoR/HDAC3 Signal- und Regulationswege, die den Lipid- und Glukosestoffwechsel, die mitochondriale Funktion sowie entzündliche Signalübertragung steuern. Eine Dysregulation von NR1D1 wurde mit veränderter zirkadianer Rhythmik und metabolischen Phänotypen in Verbindung gebracht und gilt als relevant für die Biologie kardiometabolischer und entzündlicher Erkrankungen. Genomeditierung oder gezielte Perturbation von NR1D1 ist daher nützlich, um Transkriptionsnetzwerke zu untersuchen, die der zirkadianen Regulation, der metabolischen Homöostase und der immun-metabolischen Wechselwirkung in humanen Zellmodellen zugrunde liegen.

Rev-erbα Lentivirale Aktivierungspartikel (h2) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente NR1D1-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

Rev-erbα Lentivirale Aktivierungspartikel (h2) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der NR1D1-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen Rev-erbα-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen NR1D1-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.