Plásmido CRISPR de Activación (h) Retinal RX: sc-403576-ACT

RAX (retinal homeobox) codifica el factor de transcripción Retinal RX, un regulador con homeodominio de tipo paired esencial para la especificación temprana del campo ocular y el mantenimiento de los progenitores retinianos. Actúa aguas arriba de los programas de diferenciación de fotorreceptores y de la neurorretina al coordinar redes reguladoras de genes del desarrollo e influir en las decisiones de destino celular durante el patrón del neuroectodermo. La actividad de RAX se integra con vías que controlan la proliferación y la diferenciación en la retina en desarrollo, incluidas señales que afinan la morfogénesis ocular. La desregulación de la expresión o función de RAX se asocia con malformaciones oculares congénitas como la anoftalmia/microftalmia y defectos más amplios del desarrollo retiniano, lo que respalda su relevancia en el modelado de enfermedades y en la investigación de biología del desarrollo.

Retinal RX El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de RAX sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Retinal RX El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus RAX en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional RAX, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Retinal RX. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo RAX y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Retinal RX en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Retinal RX en células tumorales con expresión de RAX silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.