Plasmide CRISPR d'Activation (h) Reptin 52: sc-402653-ACT

RUVBL2 code pour Reptin 52 (RuvB-like 2), une ATPase AAA+ impliquée dans le remodelage de la chromatine et l’assemblage de complexes multiprotéiques contrôlant la transcription, les réponses aux dommages de l’ADN et la progression du cycle cellulaire. Reptin 52 participe aux voies de l’acétyltransférase TIP60/NuA4 et du remodelage de la chromatine INO80, et contribue à la maturation, dépendante de R2TP, d’assemblages macromoléculaires, reliant ainsi la régulation des gènes nucléaires à la protéostase. Par ses interactions avec des programmes transcriptionnels oncogéniques et des voies de signalisation de réponse au stress, la dérégulation de RUVBL2 a été associée à une prolifération altérée, à des défauts de maintien du génome et à des phénotypes liés aux tumeurs. Ces propriétés font de RUVBL2 une cible utile pour étudier le contrôle épigénétique, le stress de réplication et le dialogue entre voies impliquant MYC, WNT/β-caténine et les réseaux de réparation de l’ADN.

Reptin 52 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de RUVBL2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Reptin 52 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus RUVBL2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription RUVBL2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Reptin 52. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus RUVBL2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Reptin 52 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Reptin 52 dans les cellules tumorales présentant une expression de RUVBL2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.