REPS1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422650

Descripción general

Reps1 (REPS1) codifica un adaptador endocítico implicado en la internalización de receptores y el tráfico de membranas mediante interacciones con proteínas involucradas en la endocitosis mediada por clatrina y en la señalización de pequeñas GTPasas. REPS1 participa en el control espacial de la señalización al regular el reciclaje y la desregulación (downregulation) de receptores activados en la superficie celular, influyendo en vías que modelan la proliferación, la adhesión y la dinámica del citoesqueleto. En sistemas murinos, la alteración de Reps1 se utiliza para investigar cómo el tráfico endocítico se integra con redes de señalización dependientes de factores de crecimiento e integrinas en contextos inmunitarios y epiteliales. El tráfico de receptores desregulado y la atenuación de la señal son ampliamente relevantes para mecanismos asociados a enfermedades, incluidos cambios en la migración celular y una transducción de señales aberrante, lo que convierte a Reps1 en un nodo útil para estudios mecanísticos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO REPS1 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Reps1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Reps1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Reps1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína REPS1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Reps1 para la investigación de la señalización de REPS1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Reps1 críticos para la función de REPS1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Reps1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido REPS1 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido REPS1 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Reps1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR REPS1 (m) y el plásmido HDR REPS1 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Reps1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Reps1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.